《生物化学》实验教学大纲 (供临床医学与英语本科专业使用》 前言 本课程实验教学大纲是按照本教研室自编教材《生物化学与分子生物学实验 指导》中的十九个基本实验，依实验所需时间作合理组合，每学期实验课根据实 验室情况选择开课内容而制定。实验项目8项，为一个涵盖了生物化学实验中沉 淀、离心、层析、电泳、分光光度测定及生物学功能鉴定等实验基本方法和技术 的综合性实验，共30学时。根据实验条件和教学安排适时开课。各实验涉及的 相关理论原理知识皆随实验内容随堂同步讲授。 本课程实验教学目的是通过实验使学生了解生物大分子的分离纯化和电泳 等生化技术：掌握一些常用的生化仪器如分光光度计的使用方法：通过实验培养 学生的动手能力及发现问题、分析问题和解决问题的能力· 一、学时分配表 实验序号内容 实验学时 备注 实验一 实验基木操作 4学时 必开实验 实验二 酚试剂法测定蛋白质 4学时 必开实验 实验三 血清Y一球蛋白的提纯 4学时 必开、综合性实验 实验四 血清蛋白琼脂糖凝胶电泳 4学时 必开实验 实验五 血液葡萄糖的测定，胰岛素及4学时 必开实验 肾上腺素对血糖浓度的影响 实验六 动物肝脏中提取DNA 4学时 必开、综合性实验 实验七 分子生物学实验录像 2学时 必开 实验八 实验考试 4学时 必开 总学时 90学时 30学时 二、教学内容： 实验一：实验基本操作 实验目的：掌握玻璃器皿的洗涤与干燥：掌握刻度吸管、奥氏吸管和微量加样器
的使用：掌握分光光度计的使用方法：掌握离心机的使用方法。 实验材料：15×15cm试管，刻度吸管，奥氏吸管，微量加样器，分光光度计， 离心机。 实验步骤： (1)玻璃器皿的洗涤与干燥 (2)刻度吸管、奥氏吸管和微量加样器的使用 (3)分光光度计的使用 (4)离心机的使用 实验结果：基本学会以上各项操作。 实验二：酚试剂法测定蛋白质 实验目的：掌握酚试剂法测定蛋白质含量的原理，掌握分光光度计的使用。掌握 标准曲线的做法及利用标准曲线求待测溶液的浓度。 实验材料：15×15cm试管，刻度吸管，721分光光度计，坐标计，微量加样器 2%NaC0,0.5%CuS045H,O,碱性铜溶液，Fotin-Ciocalteau酚试剂 实验步骤： (1)绘制标准曲线 (2)测定待测液吸光值，从标准曲线上查得其对应浓度。 实验结果：讨论影响标准曲线形状的因素。 实验三：血清y一球蛋白的提纯 实验目的：掌握盐析法分离蛋白质的基本原理及其操作，掌握凝胶过滤法提纯蛋 白质的原理及方法。 实验村料：免疫血清，PBS,饱和硫酸铵溶，葡聚糖凝胶，奈氏试剂，双缩脲试 剂。低速离心机，层析柱，微量移液器，离心管，滴管。 实验步罪： (1)盐析 (2)凝胶过滤法脱盐 实验结果：
观察蛋白质与铵根离子从凝胶柱中洗脱的顺序，结合凝胶过滤的原理加以说明。 实验四：血清蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验目的：掌握琼脂糖凝胶电泳的方法，掌握血浆脂蛋白的电泳分类法！ 实验材料：免疫血清，琼脂糖凝胶，载玻片，电泳仪。 实验步骤： (1)血清染色 (2)琼脂糖凝胶制备 (3)点样 (4)电泳 实验结果：观察电泳条带并与脂蛋白电泳结果对照，讨论响电泳迁移率的因素 实验五：血液葡萄糖的测定，胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 实验目的：掌握葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法测定血糖浓度的方法，理解胰岛 素和肾上腺素对血糖浓度的影响。 实验材料：家兔，防凝瓶，刀片，离心管，离心机：胰岛素，肾上腺素，酶酚混 合试剂，葡萄糖标准液。 实验步骤： (1)取血 (2)注射激素 (3)再取血 (4)测定血襟浓度并比较不同激素得到的结果 实验结果： 观察注射不同激素的家免血糖浓度的变化，理解激素对血糖浓度的调节。 实验六：动物肝脏中提取DNA 实验目的：掌握核酸分离分析的基本原理：熟悉肝中核酸分离与鉴定的操作及注 意事项；台式离心机的使用：紫外分光光度法测定核酸含量的原理及计算方法 实验材料：
(1)大白鼠或兔肝脏 (②)组织捣碎机 (3)玻璃匀浆器 (④离心机 (5)95%乙醇 (⑥75%乙醇 (⑦)EDTA缓冲液 (8)柠檬酸钠缓冲液 实验步骤： (1)材料处理 取组织块0.3~0.5cm3,剪碎加TE0.5ml,转移到匀浆器中制成匀浆。 将匀浆液转移到1.5ml离心管中，加20%SDS25ul蛋白酶K(2mgml)25μl,混匀. 60℃水浴1~3h (2)DNA提取 加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3mi。离心 5000g×10min,取上层水相到另一1.5ml离心管中。加等体积饱和酚，混匀，离 心5000g×10mim,取上层水相到另一管中。加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心 5000g×1Omi,取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。加 等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10mim,取上层水相到另一管中。加1/10体积的 3moL醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。待絮状物出现后， 离心5000g×5mim,弃上清液。沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g×3min,弃上清液 室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50~100u1TE溶解过夜。 实验结果：白色透明的DNA纤维继于玻棒上 实验七：分子生物学实验录像 实验目的：通过录像了解分子生物学实验室的基本设备和基本技术(PC℉、核酸 探针的标记与分子杂交、基因克隆和转基因动物技术等)。 实验材料：中国医学科学院北京协和医学影像出版社教学录像带
实验八：实验考试 考试目的：检测学生本学期实验课涵盖的相关理论知识的掌握及实际操作能力。 考试步骤：(1)理论考试（口头回答）：(2)操作考试 考试评价：成绩(5分)=（理论(5分）+操作(5分)2