@奉山年单花 省级精品课程申报 生物化学与分子生物学实验指导 前言 21世纪是生命科学的世纪，生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中 门重要的基础学科，它涵盖的基础理论，基本知识，基本技术与医学研究各学 科领域密切相关，其理论与技术的发展，推动了生命科学的发展，对人类的科技 进步与文明产生巨大影响。生物化学实验是医学院校学生必修的一门基础实验 技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论 和实验方法而建立起来的。20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微 镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光 谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术 的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验 方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。 本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并 掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳 法。同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究 技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。 本教材是在多版泰山医学院生物化学教研室自编教材的基础上，结合教学实 践和近年来最新进展编写而成。在教材的出版过程中得到张念华老师的帮助， 在此对为教材作出贡献的老教师和张念华老师表示衷心的感谢。 由于编者水平有限，教材中可能有一些错误和不足，望同行专家和使用者提 出宝贵意见。 编者 2008.10
M 泰山医学院 Taishan Medical University 省级精品课程申报 目录 第一章生物化学实验基本知识与操作··5 第一节生物化学实验基本知识···.5 5 第二节 8 第二章分光光度技术···20 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度···.32 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度·····.··.··34 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度···36 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度···.38 实验五BCA 法测定蛋白质浓度··.. 41 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定43 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术.50 第一节生物材料的选取与预处理····.50 第二节生物大分子的沉淀分离技术·.55 第三节生物大分子离心分离技术·58 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定6 65 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 68 实验九酪蛋白的制备····.··.·· 72 实验十动物肝脏中提取DNA. 74 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提··.·· 77 第四章电泳技术·······.····.·· 82 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳···.. 90 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳·.94 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶.·..98 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳··.··.···105
M 泰山医学院 Taishan Medical University 省级精品课程申报 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳·.·108 第五章层析技术···113 第一节 层析技术概述 ·····.········.··.···113 第二节 吸附层析 ········.·······.··.·.·.·..·.·.·115 115 第三节 分配层析 117 第四节 离子交换层析 119 第五节 凝胶层析 122 第六节亲和层析·········..·126 第七节 高效液相层析 127 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用···.··.··129 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定..132 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶···.········.··.···137 实验十二离子交换层析分离氨基酸·141 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法·······144 第六章 分子生物学基本技术···.······.··.···1 148 第一节 核酸分子杂交·······.·······.··.··· 148 第二节 聚合酶链反应····.. 152 第三节分子克隆···············.·.·· 156 实验二十二Southern 杂交分析·.··········.··.····· 160 实验二十三 Northern 杂交分析· 163 实验二十四 PCR 基因扩增·····.·······.··.···· 166 验二十五质粒DNA的提取及酶切.169 实验二十六 DNA重组实验 171 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化···172 附录一常用缓冲液的配制方法······..·· 173
泰山医学院 Taishan Medical University 省级精品课程申报 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂····.··.···184 附录三一般化学试剂的分级····.186 附录四 English words in the lab ··.······.··.··187 参考资料··.··········.····.... 190
@本山年华花 省级精品课程申报 第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 一、实验课目的与要求 (一)实验课目的 1.加深对生物化学基本理论的理解和掌握。 2.掌握生物化学的基本实验方法和实验技术。 3.培养学生严谨的科学态度和思维能力以及独立分析问题和解决问题的能 力。 (二)实验课要求 1.实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验月的、原理、预期的结 果，操作关键步骤及注意事项。 2.实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结 果，结果不良时，必须重做。 3.实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。根据实 验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。 二、实验室规则 1,严肃、认真、积极、主动地上好实验课。进实验室时要穿戴好隔离衣， 不得穿拖鞋、背心出入实验室，以免酸碱腐蚀皮肤。 2.进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具 3.要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐，按次序放置。实验完毕要按各 类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。 4.实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所， 操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹，不得随地吐痰， 乱丢纸屑。实验后要清扫实验台面、地面、试剂瓶要码放整齐。 5.要爱护仪器、节约药品。第一次实验时要按仪器清单清点仪器，负责保 管，用后如数交还，在使用时如有破损，及时报告，经指导教师检查后填写破损 单，按学校规定赔偿。 6.贵重仪器，如分光光度计、离心机等，要尽力爱护，使用前应熟悉使用